西安蓝晓科技新材料股份有限公司特种树脂工厂

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预装柱使用常见问题解答

发布时间:2017-08-26 10:57 |  点击次数:

1)流出柱子的液体减少或消失
可能原因:柱子出口关闭或泵不工作
解决方案:打开出口,检查泵有没有泄露迹象
 
可能原因:脂蛋白或蛋白聚集物沉淀了
解决方案:使用前过滤样品及缓冲液,阻止脂蛋白,避免蛋白聚集
 
可能原因:样品过于黏稠
解决方案:用缓冲液适当对样品进行稀释
 
可能原因:滤膜、接口或管道堵塞
解决方案:检查各环节,如有堵塞进行清除,或更换柱子
 
可能原因:柱子中微生物生长
解决方案:分离柱不用时将其保存于20%乙醇溶液中,对其进行在位清洗
 
2)目的蛋白峰不能同其他峰分开
可能原因:样品加载不正确
解决方案:检查柱床表面及滤膜是否被污染
 
可能原因:错误的PH或离子强度的缓冲液
解决方案:检查缓冲液的pH及离子强度,保证前一个运行后对柱子进行了再平衡,检查运行条件是否和要求
 
可能原因:柱子过载
解决方案:改变洗脱条件。改用更平缓的梯度,降低流速
减少样品加载量
 
可能原因:柱子装填柱效差
解决方案:检查柱效,如有必要更换柱子
 
可能原因:分离过程由于稳定剂的去除而导致蛋白在柱子中沉淀
解决方案:调整洗脱液以维持蛋白稳定性。
 
3)蛋白不结合或不按预期洗脱下来
可能原因:蛋白质或脂沉淀在柱子滤膜或柱子里了。
解决方案:清洗柱子,检查缓冲液的pH及离子强度。
 
可能原因:在储存过程中样品发生了改变
解决方案:制备新鲜样品。
 
可能原因:蛋白在洗脱液中不稳定或失活
解决方案:确定蛋白质稳定的pH及离子强度
 
可能原因:错误的PH或离子强度的缓冲液
解决方案:检查缓冲液的pH及离子强度,重新准备缓冲液
 
可能原因:蛋白产生集聚并同填料紧密结合
解决方案:进行在位清洗
 
可能原因:分离柱平衡不完全
解决方案:重复或延长平衡步骤直到pH及电导达平衡水平。
 
4)色谱图中的峰非常平缓或不均匀
可能原因:柱子中产生通道
解决方案:重新装柱或更换柱子
 
5)样品峰拖尾
可能原因:起始缓冲液错误,或样品不与色谱柱结合
解决方案:调整pH,检查起始缓冲液的离子强度
 
6)色谱图峰较小
可能原因:样品在选定波长吸收差
解决方案:检查检测器的吸收范围,如不满足要求,使用另一波长检测
 
7)运行中压力升高
可能原因:柱床被压缩
解决方案:重新装柱或使用新柱
 
可能原因:样品浑浊
解决方案:增加样品溶解性,使用前进行膜过滤
 
可能原因:pH错误导致沉淀
解决方案:校准pH,重新配置新溶液。
 
可能原因:离子强度增加脂蛋白产生沉淀
解决方案:提前出去脂蛋白
 
8)柱床有气泡
 
可能原因:缓冲液或样品未进行脱气
彻底脱气
解决方案:缓冲液若在冰箱保存使用前需是温度达到恒定室温
 
可能原因:环境温度发生改变
解决方案:柱子避免加热升温
 
9)柱床有裂缝
可能原因:大体积气体渗漏柱中
解决方案:检查连接点是否有泄露,或更换柱子