西安蓝晓科技新材料股份有限公司特种树脂工厂

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公司新闻

层析预装柱使用常见问题

发布时间:2019-04-24 09:09 |  点击次数:

出现的问题 可能原因 解决办法
流出柱子的液体减少或消失 柱子出口关闭或泵不工作 

脂蛋白或蛋白聚集物沉淀了 

样品过于黏稠 

滤膜、接口或管道堵塞 

柱子中微生物生长
打开出口,检查泵有没有泄露迹象 
使用前过滤样品及缓冲液,阻止脂蛋白,避免蛋白聚集 
用缓冲液适当对样品进行稀释 
检查各环节,如有堵塞进行清除,或更换柱子 
分离柱不用时将其保存于 20% 乙醇溶液中,对其进行在位清洗
目的蛋白峰不能同其他峰分开 样品加载不正确 

错误的 PH 或离子强度的缓冲液 

洗脱条件不是最佳 

柱子过载 
柱子装填柱效差 

分离过程由于稳定剂的去除而导致蛋白在柱子中沉淀
检查柱床表面及滤膜是否被污染 
检查缓冲液的 pH 及离子强度,保证前一个运行后对柱子进行了再平衡,检查运行条件是否和要求 
改变洗脱条件。改用更平缓的梯度,降低流速 
减少样品加载量 
检查柱效,如有必要更换柱子 
调整洗脱液以维持蛋白稳定性。
蛋白不结合或不按预期洗脱下来 蛋白质或脂沉淀在柱子滤膜或柱子里了。
在储存过程中样品发生了改变 

蛋白在洗脱液中不稳定或失活 

错误的 PH 或离子强度的缓冲液 
蛋白产生集聚并同填料紧密结合 
分离柱平衡不完全 

 
清洗柱子,检查缓冲液的 pH 及离子强度。
制备新鲜样品。

确定蛋白质稳定的 pH 及离子强度 
检查缓冲液的 pH 及离子强度,重新准备缓冲液 
进行在位清洗 

重复或延长平衡步骤直到 pH 及电导达平衡水平。
色谱图中的峰非常平缓或不均匀 柱子中产生通道 重新装柱或更换柱子
样品峰拖尾 起始缓冲液错误,或样品不与色谱柱结合 调整 pH,检查起始缓冲液的离子强度
色谱图峰较小 样品在选定波长吸收差 检查检测器的吸收范围,如不满足要求,使用另一波长检测
运行中压力升高 柱床被压缩 
样品浑浊
重新装柱或使用新柱 
增加样品溶解性,使用前进行膜过滤
pH 错误导致沉淀 
离子强度增加脂蛋白产生沉淀
校准 pH,重新配置新溶液。
提前出去脂蛋白
柱床有气泡 缓冲液或样品未进行脱气 
环境温度发生改变
彻底脱气 
缓冲液若在冰箱保存使用前需是温度达到恒定室温 
柱子避免加热升温
柱床有裂缝 大体积气体渗漏柱中 检查连接点是否有泄露,或更换柱子