西安蓝晓科技新材料股份有限公司特种树脂工厂

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公司新闻

蓝晓科技生物纯化 离子交换 胰糜蛋白酶的分离纯化

发布时间:2019-07-01 09:02 |  点击次数:

胰糜蛋白酶的分离纯化
 

胰蛋白酶在医药、食品、工业和有机合成中具有广泛应用。临床上可用于抗炎症和消化药物的复配;食品加工中用于酒类和饮料的澄清、畜蛋白原的水解、胰蛋白胨的制备和除去乳品在贮藏时氧化产生的味道;工业上用于皮革加工和生丝处理。糜蛋白酶为胰腺分泌的重要蛋白质水解酶,能迅速分解蛋白质,消化溶解变性蛋白质。临床用于多种疾病的治疗,并取得良好效果,如颅内感染性炎症、呼吸系统感染及炎症、消化系统的感染及炎症等。因此,胰糜蛋白酶的纯化研究具有重要的经济和技术意义。
 

蓝晓科技(股票代码:300487)生命科学事业部致力于开发、生产生物分子分离纯化用层析介质,拥有琼脂糖、葡聚糖、高分子聚合物三种基架的凝胶过滤、离子交换、疏水、亲和等各种层析介质百余种。目前,工业上对于胰糜蛋白酶的纯化,常用离子交换层析介质和亲和层析介质。本次实验针对蓝晓科技生产的 seplifeR 离子交换层析介质和 seplife R 亲和层析介质进行胰糜蛋白酶的纯化工艺探究。

一.亲和层析工艺 

Benzamidine seplife 4FF 是蓝晓科技研发生产的一款亲和层析介质,专门用于胰糜蛋白酶的分离。该层析介质对胰蛋白酶有特异性吸附,吸附载量大于 35 mg/mL,对糜蛋白酶吸附小于 3 mg/mL,且实验条件对胰糜蛋白酶的活性无影响。

1. 色谱条件:
色谱柱:26*20 ;装柱高度:10 cm;流速:5 ml/min;
缓冲液 A:Tris-HCl + NaCl;
缓冲液 B:Tris-HCl;
样品说明:胰糜蛋白酶含量相当,有少量杂质。

2. 色谱图


 

3. 结果分析

分别对原液、流穿液、洗脱液中蛋白浓度和胰糜蛋白酶的效价进行测定。蛋白浓度通过紫外吸收法,效价测定根据中国药典 2015 年版胰糜蛋白酶的效价测定方法。                                                                                                                                                                                                                                                                                                

项目 糜效 u/mg 胰效价 u/mg
上样液 1109 990.81
流穿液 1447.46 0
洗脱液 0 2660.38







中国药典 2015 年版规定糜蛋白酶的效价不小于 1000 单位/mg;胰蛋白酶效价不得少于 2500 单位/mg。由此可以看出蓝晓科技开发生产的 Benzamidine seplife 4FF 亲和层析介质可以用来生产满足药典要求的胰蛋白酶和糜蛋白酶。

二.离子交换层析工艺 

CM Seplife FF 是蓝晓科技开发生产的一款弱阳离子交换层析介质,吸附载量可达 60 mg 溶菌酶/mL 介质,质量稳定,蛋白活性回收率高。

1. 色谱条件:
色谱柱:26*20 ;装柱高度:10 cm;流速:5 ml/min;
缓冲液 A:HAc-NaAc;
缓冲液 B:HAc-NaAc + NaCl;
样品说明:客户提供的粗提液,含较多杂质,糜蛋白酶含量高,胰蛋白酶含量低。

2. 色谱图


 

3. 结果分析 

分别对原液、流穿液、洗脱液 1,2,3 中蛋白浓度和胰糜蛋白酶的效价进行测定。蛋白浓度通过 Bradford 法测定,效价根据中国药典 2015 年版胰糜蛋白酶的效价测定方法。                                                                                                                                           

项目 糜效价 u/mg 胰效价 u/mg
上样液 573 70
流穿液
洗脱峰 1
洗脱峰 2 1460
洗脱峰 3 286










流穿液中全为杂质,洗脱峰一为杂蛋白,洗脱峰二为糜蛋白酶,洗脱峰三为胰蛋白酶。糜蛋白酶效价满足要求的纯化后不少于 1200 单位/mg。由此可见,CM Seplife FF 对胰糜蛋白酶也能达到良好的分离效果,可用于生产满足药典要求的糜蛋白酶。

三.小结 

通过以上实验可以看出,在实际生产过程中,蓝晓科技开发生产的 Benzamidine seplife 4FF、CM Seplife FF 均可用于胰糜蛋白酶的分离纯化,具体选择要根据样品情况而定。另外,不同的缓冲液体系对分离效果也有影响。(除了 Benzamidine seplife 4FF、CM Seplife FF,蓝晓科技开发生产的 DEAE Seplife FF 也可用于胰糜蛋白酶的分离纯化,该部分内容将于下期继续介绍。)

胰糜蛋白酶专用层析介质 

DEAE seplite  胰糜蛋白酶专用层析介质是一种离子交换介质,专门用来纯化胰糜蛋白酶。

产品特点:

  • 高物理稳定性的专用凝胶,针对胰糜蛋白酶特性进行了专门改造,能在最短时间内浓缩,可以用于产品的粗提。

  • 流速快,处理量大。

  • 分离过程是配基所带电荷与样品蛋白所带相反电荷以及洗脱剂离子间的离子交换竞争过程。

  • 操作简单,流动相便宜,蛋白活性回收率高。
     

产品指标:

货号 产品牌号 规格 基质 吸附量 离子交换量 
mmol/ml
最高流速 
cm/h   
耐压 
Mpa
pH 稳定性 应用
A2053202
A2053203
胰糜蛋白酶专用层析介质 25 ml
100 ml
专用 seplite 6FF 110 mgHSA/ml 介质 0.11-0.16 500~1200     0.3 2~12(1~14) 专门用于胰糜蛋白酶离子交换粗分离
A2053204 500 ml
A2053205
A2053206
A2053207
1L
5L
10L